怎麼估呢？就如同上次寫了關於成像圈的一些注意事項《簡易顯微測量-成像圈很重要》，只要用一把尺，拍下它在顯微鏡下的影像就可以，而且因為倍率的變化都是固定的，物鏡從4x 到10x到40x，所以其實只要拍下在4x物鏡下的影像就可以，剩下的可以用估算。
不過我上次拍了自家顯微鏡的影像之後，我還是很好奇，用隨便一把尺和用顯微測微尺來看，誤差到底有多少。我們家的顯微鏡倍率分別是40x、100x、400x，上次測量的結果，視野直徑依序為4200µm、1680µm、420µm，這次我特別拿了玻片的測微尺來測量，看看結果會如何？
顯微鏡的測微方式，通常有兩個部份，一個是特製玻片，上頭有很小很小的刻度，以我手邊的這種來說，它是1mm的長度中，刻劃了100個刻度，所以每個刻度之間的距離是 0.01mm，也就是10µm。通常搭配使用的還有一小片玻璃片，上頭也有刻度，那是裝在目鏡裡用的。使用時，用已知長度的測微玻片來校正目鏡的刻度，舉例來說，像下面這張圖，是我用10倍目鏡10倍物鏡下拍攝的，我的目鏡測微尺的刻度，剛好和玻片上的刻度吻合，在這個倍率下，我的每個小刻度就等於10µm，日後我就可以用這個目鏡測微尺來量度顯微鏡下物體的長度。
然而不同的倍率下，目鏡測微尺的刻度不像這次這麼吻合，像我在40倍的倍率下，40格的目鏡測微尺長度等於1 mm(1000µm），所以我40倍的刻度是每格代表25µm，而400倍下則是每格代表2.5µm。
雖然這種測量方式還不錯，但是若要改成用電腦來協助測量，那作法就稍有改變了，我們不需要目鏡裡的那個測微尺。我們只要把測微玻片放在載物台上，每個倍率拍一張照片，特別注意要把視野全部都拍攝近來。
這個是我家顯微鏡的40x
這是100x
這則是400x
既然我們已經知道每個刻度都是10µm，那麼我們就可以用imagej估計出整個視野的長度了。我測量出來的結果，和先前用那個普通尺的結果誤差不大。我的三個倍率下（40x、100x、400x)
視野長度分別為4617 µm、1830µm和452µm。
所以未來我用這台顯微鏡進行顯微攝影時，只要知道是用哪個倍率，而且有拍攝到成像圈（不需要全部完整，但至少要能抓出直徑），那麼我就可以改用成像圈來當比例尺，藉而估算細胞的大小了。
我做完這個之後，突然有個小問題，如果兩台顯微鏡的型號不同，但倍率都相同，那麼視野的寬度是否都相同呢？後來我拿了學校的顯微鏡，兩台都是15倍目鏡，總放大倍率依序為60x、150x、600x，結果發現兩者的視野寬度還是略有不同。
以這種反光鏡式的顯微鏡，60x 下是2422 µm，150x是 934 µm，而600x 是234 µm。若是把目鏡換成WF(wide field）的，雖然是同樣倍率，但視野寬度也不同。所以若要用顯微鏡的成像圈當作測量的比例尺，還是要每個顯微鏡各自建檔。
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我有個想法，學生把細胞都畫完以後，我打算要他們把所有的細胞，畫在同樣的比例尺上，藉以比較各種不同細胞的大小。會想到這點是因為連我自己都很難想像，同樣是人類的細胞，彼此的大小就差非常多。
比方說口腔皮膜細胞和紅血球細胞，我在沒作這種比例尺比較之前，我從沒想過紅血球居然只有口腔皮膜細胞的細胞核大而已（下圖中左右的比例尺皆同）。
上面這張圖的作法，我是先用Gimp開啟有400x 成像圈的口腔皮膜，然後把紅血球的影像（也有成像圈）放在同一張，先把兩者的成像圈調成一樣大，因為拍照時能會拍得不一樣，然後我再用imagej開啟，先用已知成像圈的大小（400x下 452µm)來 set scale，然後再用Analyze >Tools>Scale Bar..，來設定比例尺。
課程設計安排的部份，像今年我教資優班，有多一些上課時間，所以我就可以在另外的專研課教imagej，教怎麼用電腦來設定比例尺計算長度，而教普通班時，因為時間沒那麼多，所以就會直接教長度換算，例如告訴他們現在用的顯微鏡某某倍率下，視野寬度有多長，請他們試試看估算細胞的長度。
