這篇的實作來自這本《Your Microscope Hobby: How To Make Multi-colored Filters: Rheinberg, Polarizing, Darkfield and Oblique》，介紹如何自己製作顯微鏡的濾鏡。
先直接看效果吧，我製作了不同濾鏡，然後拍攝百合花粉的顯微照，都是同樣的標本。
若是想要對顯微鏡下的影像增強對比、增強辨識度，我們在國中就學到了，可以使用化學染色的方式。但是化學染色操作上有些困難，有些染劑具有毒性對人體有危險性，而且會殺死目標生物，所以若是想觀測活細胞，就不能用化學染色（除非能使用不殺死細胞的染色方式）。
要增強對比還有其他方式，像是使用相位差(phase contrast)、暗視野（暗場，dark field）、斜射照明（Oblique Light）、微分干涉顯微鏡（differential interference-contrast microscopy）。
或是本篇介紹的光學染色（Optical Staining），使用萊茵貝格濾鏡（Rheinberg filter）。而只要會製作萊茵貝格濾鏡，更可以延伸製作出可變偏光Variable Darkfield（使用單片偏光片）以及Polarized Rheinberg（中央擋板為彩色片，外環為偏光片）。
萊茵貝格濾鏡的使用限制
萊茵貝格濾鏡易於製作、操作，價格也很便宜，但是使用上受限於顯微鏡的類型。首先必須要有聚光器。最早的聚光器，要算是虎克的那個有名顯微鏡，裝了水的透明圓球和一個平凸透鏡，構成了聚光器。
我們顯微鏡的聚光器，是這類型的搖出式濾鏡放置座的阿貝式聚光器，聚光器可以把底部的鹵素燈光源聚光成光錐，投射到標本上。
我們學校十多年前買的學生用顯微鏡還有這個結構，但是最近採購的顯微鏡都已經沒有這個東西了，特別是新近使用LED作為光源的顯微鏡，也沒有這個聚光器了。
能使用萊茵貝格濾鏡的聚光器，像是一般的阿貝氏聚光器(Abbe condenser)或是消色差聚光器(achromatic condenser)都可以，而平場聚光器(plan condenser)沒辦法使用。NA值越大的聚光器會比較好（例如1.9NA會比1.4NA好）
萊茵貝格濾鏡一般適用的物鏡是20x以下的消色差物鏡，像是10x、4x的物鏡。若是要使用在更高倍的物鏡上，則需要精密測量才能製作，因為高倍物鏡的鏡頭更小了。
物鏡的部份，如果是使用Neofluor、plan-apo或是phase contrast的物鏡，結果可能比一般消色差物鏡要差。
物鏡的部份，如果是使用Neofluor、plan-apo或是phase contrast的物鏡，結果可能比一般消色差物鏡要差。
萊茵貝格濾鏡製作所需的材料與工具
了解使用限制之後，來看看材料和工具。萊茵貝格濾鏡包括二個部份，一個是中央擋板（center stop），第二是外環(annuel)。中央擋板提供背景色，而外環則是提供照射物體所需的光源，需要透明度較高的材質。關於萊茵貝格濾鏡的光路圖，可以看以下的網站，有很清楚的說明
https://micro.magnet.fsu.edu/primer/techniques/rheinberg.html
製作濾鏡的基本工具是圓規刀、切圓器、護貝機、護貝膠膜、游標尺
材料則是黑紙、絕緣膠帶、玻璃紙，或是任何你想到的有色透明材料都可以試試看。
黑紙是用來製作暗視野濾鏡，以及提供後來製作萊茵貝格濾鏡的口徑參考。
2.用割圓器切割出直徑15~30mm的圓形黑紙片，然後把它們都護貝起來，再用割圓器切割成直徑32mm的圓。（這步驟請不要使用圓規刀，因為會造成中間有洞）
3.使用矽藻、花粉、棉纖維、蝴蝶翅膀等標本來作顯微鏡觀察。
4.先進行一般明視野的觀察，但是僅使用4x物鏡，不加任何濾鏡、光圈開到最大、聚光器抬到最高，看清楚之後，不作任何調整，直接進行下一步。
5.在聚光器的濾鏡座放入前面製作的黑圓片。測試不同尺寸的濾光片，看看用到哪個直徑的中央擋板可以達到背景全黑。（一般適用的直徑為15-18mm，但適用我顯微鏡的尺寸是22mm）
6.接著再換10x物鏡來測試一次，有些顯微鏡在4x和10x物鏡(0.25 NA)可以用同一尺寸的中央擋板濾鏡，如果你的沒辦法，那就要不同倍率物鏡就作不同直徑的濾鏡。
這是明視野下花粉的樣子
成功的暗視野觀察會像是這樣，具有黑色的背景，而標本還是能清楚看到。
中央擋板透明度可以低一些，提供明度較低的背景，而外環的透明度就要高一些。建議可以用絕緣膠帶來作中央擋板，如果膠帶不夠寬，可以將兩三條膠帶貼在一起，這樣就變寬了。外環則是用玻璃紙來製作，當然你反過來製作也可以。
製作中央擋板的部份要注意不要使用圓規刀，如果只能用圓規刀，就要小心不要讓中央有洞。單純製作外環的話則是沒關係，反正中間的部份會被挖掉。而如果想要把切下來的圓形當作中央擋板那就要注意了（這是無限迴圈嗎）
製作濾鏡的基本工具是圓規刀、切圓器、護貝機、護貝膠膜、游標尺
材料則是黑紙、絕緣膠帶、玻璃紙，或是任何你想到的有色透明材料都可以試試看。
黑紙是用來製作暗視野濾鏡，以及提供後來製作萊茵貝格濾鏡的口徑參考。
製作流程
1.先用游標尺量聚光器上的濾鏡座尺寸內徑，一般顯微鏡都是32mm左右，高級一些的顯微鏡可能會用到35mm或是42mm、45mm。2.用割圓器切割出直徑15~30mm的圓形黑紙片，然後把它們都護貝起來，再用割圓器切割成直徑32mm的圓。（這步驟請不要使用圓規刀，因為會造成中間有洞）
3.使用矽藻、花粉、棉纖維、蝴蝶翅膀等標本來作顯微鏡觀察。
4.先進行一般明視野的觀察，但是僅使用4x物鏡，不加任何濾鏡、光圈開到最大、聚光器抬到最高，看清楚之後，不作任何調整，直接進行下一步。
5.在聚光器的濾鏡座放入前面製作的黑圓片。測試不同尺寸的濾光片，看看用到哪個直徑的中央擋板可以達到背景全黑。（一般適用的直徑為15-18mm，但適用我顯微鏡的尺寸是22mm）
6.接著再換10x物鏡來測試一次，有些顯微鏡在4x和10x物鏡(0.25 NA)可以用同一尺寸的中央擋板濾鏡，如果你的沒辦法，那就要不同倍率物鏡就作不同直徑的濾鏡。
這是明視野下花粉的樣子
成功的暗視野觀察會像是這樣，具有黑色的背景，而標本還是能清楚看到。
萊茵貝格多色濾鏡的製作過程
你可以把萊茵貝格濾鏡的外環和中央擋板分開製作，這樣能夠任意組合想要的效果，或是結合暗視野、斜射照明的濾鏡。當然你也以直接將外環和中央擋板組合在一起，不過這樣就缺少很多自由。中央擋板透明度可以低一些，提供明度較低的背景，而外環的透明度就要高一些。建議可以用絕緣膠帶來作中央擋板，如果膠帶不夠寬，可以將兩三條膠帶貼在一起，這樣就變寬了。外環則是用玻璃紙來製作，當然你反過來製作也可以。
製作中央擋板的部份要注意不要使用圓規刀，如果只能用圓規刀，就要小心不要讓中央有洞。單純製作外環的話則是沒關係，反正中間的部份會被挖掉。而如果想要把切下來的圓形當作中央擋板那就要注意了（這是無限迴圈嗎）
下圖最左行是利用偏光片製作的，可以讓標本有不同的背景。第二直行是直接把外環和中央擋板作在一起，其他則都是外環和中央擋板分開製作的濾鏡。
藍色中央擋板，適用在黃色標本，讓對比明顯
藍色中央擋板，再加上紅色外環，可以讓標本顏色偏紅
你也可以做出多色濾鏡
使用綠色黃色的中央擋板
使用多色的中央擋板（紅綠藍黃），會在背景產生多種顏色漸層的效果
多色濾鏡的製作方式，是把玻璃紙（濾色片）先排好放在護貝膠膜裡護貝，然後切割出中央擋板和外環，再把切下來的東西再護貝一次，切割下來。
而利用黑紙，也可以製作出不同斜射照明濾鏡，效果類似微分干涉顯微鏡，能讓標本具有立體感。
這是利用月形的斜射照明濾鏡（第四行第四個），有特別的立體感
月形的濾鏡加上藍色中央擋板，提供立體感外，再加上暗藍色背景
收納的方式則是用圓盒子裝起，就可以任意組合使用了。
以下則是不同的樣本照，最左和最右是用不同的藍色中央擋板，中央則是未經過白平衡，也沒有加濾鏡。
不同濾鏡下的花粉
完全透明的口腔皮膜細胞，使用不同濾鏡也可以看清楚不同的細節。
這也有另外一種作法，是用印表機印出濾片的
http://www.quekett.org/resources/rheinberg
